Efeito de protocolo hormonal e programa de luz artificial na gestação de éguas receptoras de embrião durante o período de transição de primavera / Effect of hormonal protocol and artificial light program on the pregnancy of embryo recipient mares during spring transition period

O objetivo do estudo foi comparar o efeito das técnicas hormonais e de luz artificial nas éguas receptoras de embrião acíclicas avaliando as taxas de gestação aos 14 e 28 dias durante a fase de transição de primavera. Os 48 animais foram distribuídos aleatoriamente nos grupos: controle (CONT, n=16), éguas cíclicas na fase ovulatória; luz artificial (LUZ, n=16), éguas acíclicas submetidas ao tratamento de luz artificial; e hormônio (HORM, n= 16), éguas acíclicas submetidas ao protocolo hormonal na fase de transição. As éguas do grupo LUZ foram estimuladas por 60 dias com luz artificial durante cinco horas por dia. Nos grupos CONT e LUZ, quando observada a presença de folículo ≥ 35 mm de diâmetro e edema uterino ≥ grau II, foram administrados 1,5 mg de acetato de deslorelina e 1500 UI de hCG para induzir a ovulação. As éguas do grupo HORM foram tratadas com três doses de 1,5 mg de benzoato de estradiol e seguiram os mesmos protocolos dos Grupos CONT e LUZ. Foi avaliada a taxa de gestação por ultrassonografia aos 14 dias e confirmação aos 28 em todos os grupos experimentais. Foi realizada análise descritiva e teste Qui-quadrado (significância de 5%). Taxas de gestação aos 14 e 28 dias foram semelhantes (p>0,05) entre todos os grupos. Os tratamentos HORM e LUZ durante o período de transição inverno-primavera mostraram-se eficazes para atender ao programa de transferência de embrião. Por ser um método mais natural, o protocolo LUZ tem potencial como mais uma ferramenta biotecnológica na reprodução de equinos.

The aim of this study was to compare the effect of hormonal and artificial light techniques on acyclic embryo recipient mares by assessing pregnancy rates at 14 and 28 days during the spring transition period. The 48 animals were randomly assigned to the groups: control (CONT, n = 16), cyclic mares in the ovulatory phase; artificial light (LIGHT, n = 16), acyclic mares subjected to artificial light treatment; and hormone (HORM, n = 16), acyclic mares submitted to hormonal protocol in transition phase. In the LIGHT group, mares were stimulated with artificial light for five hours a day, for 60 days. In CONT and LIGHT groups, when a follicle ≥ 35 mm in diameter and uterine edema ≥ grade II were observed, 1.5 mg of deslorelin acetate and 1500 IU hCG were administered to induce ovulation. In the HORM group, mares were treated with three doses of 1.5 mg of estradiol benzoate and followed the same protocols as the CONT and LIGHT groups. Pregnancy rate was assessed by ultrasound at 14 days and confirmation at 28 days in all experimental groups. Descriptive analysis and chi-square test (5% significance) were performed. Pregnancy rates at 14 and 28 days were similar (p> 0.05) among all groups. The HORM and LIGHT treatments during the winter-spring transition period proved to be effective during the embryo transfer programs. As it is a more natural method, the LIGHT protocol has the potential to be one more biotechnological tool in equine reproduction.

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%. In ejaculate samples, higher values of total morphological defects were observed after 24 and 48 hours of refrigeration at 4°C (P<0.022) compared to refrigeration at -1°C, using Friedman test. To quantify the decrease in sperm quality, parameter reductions were calculated among time points (F-24h/F-48h/24h-48h). In EPD samples, a greater reduction in sperm quality was detected after 24 hours of refrigeration at 4°C, both in motility and sperm kinetics and in the movement and velocity indices, compared to refrigeration at -1°C. Based on the results, it can be concluded that cooling of feline spermatozoa at -1°C for up to 48 hours was efficient in maintaining spermatic quality collected by EEJ and EPD, and it could be an alternative to spermatozoa cryopreservation in domestic felines.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%. No ejaculado, maiores valores de defeitos morfológicos totais foram observados após 24 e 48 horas de refrigeração a 4°C (P<0,022) em comparação com refrigeração a -1°C, usando o teste de Friedman. Para quantificar a diminuição na qualidade espermática, as reduções dos parâmetros foram calculadas entre os pontos de tempo (F-24h/F-48h/24h-48h). Na EPD, uma maior redução na qualidade espermática foi detectada após 24 horas de refrigeração a 4°C, tanto na motilidade e na cinética espermática quanto nos índices de movimento e velocidade, em comparação com a refrigeração a -1°C. Com base nos resultados, pode concluir-se que a refrigeração dos espermatozoides felino a -1°C, até 48 horas, foi eficaz na manutenção da qualidade espermático colhidos por EEJ e EPD, e pode ser uma alternativa para a criopreservação de espermatozoides em felinos domésticos.(AU)

Reproductive disorders in does experimentally infected by Toxoplasma gondii / Distúrbios reprodutivos em cabras experimentalmente infectadas por Toxoplasma gondii

The aim of this study was to describe the reproductive disorders related to experimental infection by artificial insemination with semen contaminated with Toxoplasma gondii of four goats in the chronic phase of the infection. In the end of the study, the does were submitted to necropsy, and PCR and histopathological evaluations were performed. Among infected does that exhibited embryonic loss, two were in anestrus and two exhibited repeated estrus. One of the latter animals exhibited clinical signs of estrus at seven-day intervals, whereas the other had a 21-day estrous cycle. However, both does were naturally mated on subsequent natural estrous and were not able to get pregnant until the end of the experiment (90 d). Two of the goats exhibited abnormalities in the ultrasound examinations, one of which was an ovarian cyst, while the other was a hydrosalpinx, both of which were confirmed in the post-mortem examination. The main microscopic injuries in this group were neutrophilic infiltration of the lungs, interstitial glomerulonephritis and neutrophilic infiltration of the liver. T. gondii DNA was found in the organs (heart and brain) of three does. In conclusion, does infected with Toxoplasma gondii in semen at the time of artificial insemination display reproductive disorders in the chronic phase of infection that might be associated with toxoplasmosis.

Objetivou-se descrever os distúrbios reprodutivos associados à infecção experimental por Toxoplasma gondii através da inseminação artificial com sêmen contaminado em quatro cabras no estágio crônico da infecção. As características do trato reprodutor foram avaliadas através de ultrassonografia transretal, visando o diagnóstico gestacional ou de desordens reprodutivas, após a infecção experimental. Ao final do experimento, os animais foram necropsiados e avaliações histopatológicas e PCR foram realizados. Dentre os animais infectados que exibiram mortalidade embrionária, duas apresentaram anestro e duas apresentaram repetição de estro, sendo que destas uma apresentou intervalos entre estros reduzido (sete dias) e outra em intervalo regular (21 dias). Todavia, ambas foram submetidas a monta natural durante os estros naturais subsequentese não foi confirmada gestação até o final do experimento (90 dias). Duas cabras exibiram alterações nos exames de ultrassonografia, sendo identificadas um cisto ovariano, e uma hidrossalpinge, ambas confirmadas no exame post-mortem. As principais lesões microscópicas nesse grupo foram infiltração neutrofílica dos pulmões, glomerulonefrite intersticial e infiltração neutrofílica do fígado. O DNA de T. gondii foi encontrado nos órgãos (coração e cérebro) de três cabras. Em conclusão, cabras infectadas comsêmen contendoT. gondii no momento da inseminação artificial apresentam distúrbios reprodutivos na fase crônica da infecção que podem estar associados à toxoplasmose.

Decontamination of genetically modified mice strains by embryo transfer for obtaining SPF colonies in a Brazilian animal facility / Descontaminação de linhagens de camundongos geneticamente modificadas por transferência embrionária para obtenção de colônias SPF em um biotério brasileiro (São Paulo, SP)

The introduction of new strains of mice in specific pathogen-free (SPF) animal facilities should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers. To meet this need, animals should be rederived to reduce infection risk and thus avoid research interference caused by loss of animal health status and welfare. The objective of this study was to implement mice embryo transfer in the laboratory mouse facility of the Department of Immunology at the Institute of Biomedical Sciences/University of São Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive genetically modified mouse strains with undefined sanitary status, received from different research and educational institutions. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by natural means and transferred into the oviducts of SPF pseudo-pregnant female mice. All surgical procedures were performed under aseptic conditions. A total of 625 embryos were transferred into the recipients. 148 pups were born, of which 140 were reared. Viruses, bacteria and intestinal protozoa were eliminated using this technique. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility. With these results, we can stimulate the use of embryo transfer technique between rodent facilities in Brazil and thus encourage the distribution of better models to our scientific community.(AU)

A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios livres de patógenos específicos (SPF) deve ser realizada com critérios para evitar a quebra das barreiras sanitárias. Dessa forma, os animais devem ser rederivados para reduzir os riscos de infecção e evitar as interferências provocadas pela perda do status sanitário e do bem-estar dos animais. O objetivo deste estudo foi implementar a transferência de embriões murinos no Biotério do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, Brasil. As transferências embrionárias foram realizadas para rederivar linhagens de camundongos geneticamente modificadas com status sanitário não conhecido, recebidas de diferentes instituições de pesquisa e de ensino. Os embriões em duas células foram obtidos pelos métodos naturais e transferidos para os ovidutos de fêmeas de camundongos SPF pseudoprenhas. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob condições assépticas. Um total de 625 embriões foram transferidos para as receptoras. Foram obtidos 148 filhotes nascidos vivos, destes 140 foram desmamados. Por meio desta técnica, foram eliminados vírus, bactérias e protozoários intestinais. A melhora no status microbiológico dos camundongos permitiu a expansão destes em nossa colônia SPF. Com esses resultados, podemos promover o uso da técnica de transferência de embriões entre os biotérios brasileiros e assim incentivar a distribuição de modelos mais adequados para a nossa comunidade científica.(AU)

Interval in the replacement of in vitro culture medium affects the integrity and development of equine preantral follicles / Intervalo na substituição do meio de cultivo in vitro afeta a integridade e o desenvolvimento de folículos pré-antrais equinos

The efficiency of a culture system is related to the elaboration and replacement of a medium with conditions suitable for follicular development. Recent investigations suggested that in vitro culture medium should be replaced after specific time periods in various species. However, the suitable interval for the exchange of in vitro culture medium has not yet been established in equine species. The objective of this investigation was to evaluate the effect of medium exchange intervals of 24 hours (T24) or 48 hours (T48) for in vitro culture of preantral follicles at 2 or 6 days. At the end of the culture period, the fragments were processed using classical histology. Equine preantral follicles were classified according to morphological integrity and developmental stage. Data analysis was performed using Fisher's test with a significance level of p<0.05. Out of a total of 399 follicles evaluated, 174 (43.6%) were primordial follicles, 225 (56.4%) were in development, and 63.76% were morphologically intact. In the in vitro culture performed over two days, there was no significant difference in relation to follicular integrity after medium replacement (p>0.05). Compared to the medium replacement at six days of culture, there was a statistically significant difference for T24 (68.9%, p<0.05). Therefore, we suggest changing the medium for equine species at 48 hours after the start of culture followed by subsequent daily replacements.(AU)

A eficiência de um sistema de cultivo está relacionada à elaboração e substituição do meio de cultivo com condições adequadas ao desenvolvimento folicular. Pesquisas recentes sugerem que o meio de cultivo in vitro deve ser substituído após períodos de tempo específicos para várias espécies. No entanto, o intervalo adequado para a troca de meio de cultivo in vitro ainda não foi estabelecido na espécie equina. O objetivo desta investigação foi avaliar o efeito de intervalos de troca média de 24 horas (T24) ou 48 horas (T48) para cultivo de folículos pré-antrais aos 2 ou 6 dias. No final do período de cultivo, os fragmentos foram processados ​​usando histologia clássica. Os folículos pré-antrais equinos foram classificados de acordo com a integridade morfológica e o estágio de desenvolvimento. A análise dos dados foi realizada utilizando o teste de Fisher com um nível de significância de p<0,05. De um total de 399 folículos avaliados, 174 (43,6%) foram folículos primordiais, 225 (56,4%) estavam em desenvolvimento e 63,76% estavam morfologicamente intactos. No cultivo in vitro realizado ao longo de dois dias, não houve diferença significativa em relação à integridade folicular após a substituição do meio (p>0,05). Comparado com a substituição média aos seis dias de cultivo, houve diferença estatisticamente significativa para T24 (68,9%, p<0,05). Portanto, sugerimos alterar o meio para as espécies equinas às 48 horas após o início da cultura, seguindo as subsequentes substituições diárias.(AU)

Assessment of different in vitro sperm challenges and in vivo fertility of bovine semen batches / Avaliação de diferentes desafios espermáticos in vitro e da fertilidade in vivo de partidas de sêmen bovino

The aim of this work was to submit sperm cells to different laboratory challenges and to compare in vitro results with in vivo semen fertility. Four different batches from the same Brangus bull were used in a timed-AI program of 332 Brangus cows. Each batch (B) was submitted to the following procedure: semen sample was thawed at 36°C for 30 seconds (control). Sperm motility parameters, plasma membrane integrity, sperm morphology, and concentration were assessed. Then, an aliquot of thawed sample was incubated in a water bath at 45°C for 40 min (thermal challenge group; TCG) and another aliquot was centrifuged at 500 xg (Percoll gradient 45%/90%) for 15 min (centrifugation challenge group; CCG). Centrifuged semen was also submitted to another thermal challenge, being incubated (water bath) at 45°C for 40 min (centrifugation + thermal challenge group; CTCG). At the end of each challenge (CCG, TCG, and CTCG), the same laboratory tests used for control group were repeated. The following conception rates (CR) were observed for each batch: B1 = 48.9% (44/90); B2 = 44.2% (23/52); B3 = 55.5% (40/72); B4 = 43.2% (51/118); (p < 0.10). In the lab, B3 presented higher (p ≤ 0.05) progressive motility (PM) than B4 after thawing (control group) and after all sperm challenges (TCG, CCG, and CTCG). However, despite B3 and B4 having demonstrated a similar percentage of plasma membrane integrity (PMI) to the control group (B3 = 66.7 ± 1.3 and B4 = 65.2 ± 3.3), B3 demonstrated higher (P ≤ 0.05) percentage of PMI (37.2 ± 2.5) than B4 (26.7 ± 3.3) after passing through the most stressing in vitro challenge (CTCG). The semen batch presenting the highest resistance to in vitro challenges was the one that presented a trend for higher in vivo fertility, suggesting that submitting semen samples to laboratory challenges may be an interesting alternative for selecting batches with greater field fertility.(AU)

O objetivo deste estudo foi estressar células espermáticas em diferentes desafios laboratoriais e comparar os resultados in vitro com a fertilidade in vivo do sêmen. Quatro partidas de um mesmo touro Brangus foram utilizadas em um programa de IATF de 332 vacas Brangus. Cada partida foi submetida ao seguinte procedimento: a amostra de sêmen foi descongelada a 36°C por 30 segundos (grupo controle). Foram avaliados parâmetros de motilidade espermática (CASA), integridade da membrana plasmática (PMI), morfologia e concentração espermática. Em seguida, uma alíquota da amostra descongelada foi incubada em banho-maria a 45°C durante 40 minutos (grupo de desafio térmico, TCG) e outra alíquota foi centrifugada a 500 xg (gradiente de Percoll 45%/90%) durante 15 min (grupo desafio de centrifugação, CCG). Uma aliquota do sêmen centrifugado foi ainda submetida ao desafio térmico, sendo incubado a 45°C durante 40 min (grupo de desafio térmico + centrifugação, CTCG). No final de cada desafio (CCG, TCG e CTCG), os mesmos testes laboratoriais utilizados para o grupo de controle foram realizados. A seguinte taxa de concepção (CR) foi observada para cada partida (B): B1 = 48,9% (44/90), B2 = 44,2% (23/52), B3 = 55,5% (40/72) e B4 = 43,2% (51/118); (P < 0,10). No laboratório, B3 apresentou maior (P ≤ 0,05) motilidade progressiva (PM) do que B4 logo após o descongelamento (grupo controle) e após todos os desafios laboratoriais (TCG, CCG e CTCG). Porém, apesar de B3 e B4 demonstrarem similar porcentagem de PMI no grupo controle (B3 = 66,7 ± 1,3 e B4 = 65,2 ± 3,3), B3 apresentou maior (P ≤ 0,05) PMI (37,2 ± 2,5%) do que B4 (26,7 ± 3,3%) após passar pelo maior desafio laboratorial (CTCG). A partida seminal que in vitro apresentou maior resistência aos desafios laboratoriais foi a mesma que apresentou tendência para maior fertilidade in vivo. Assim, sugere-se que submeter amostras seminais a desafios laboratoriais pode ser uma alternativa interessante para selecionar partidas com maior fertilidade a campo.(AU)

Recovery of sperm after epididymal refrigeration from domestic cats using ACP-117c and Tris extenders / Recuperação de espermatozoides após refrigeração do epidídimo de gatos domésticos utilizando os diluidores ACP-117c e Tris

We aimed to compare fresh sperm and sperm cooled to 4ºC that had been recovered from the epididymides of cats using powdered coconut water (ACP-117c) and Tris extenders. Sixty epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4°C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4°C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The testis-epididymis complexes (TEC) control were not cooled. The others were cooled at 4°C for 2 or 4h. The epididymis was separated and the sperm was recovered by the modified flotation method. Sperm kinetic parameters were evaluated by a computer-system analysis, and vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were assessed under a light microscope. The progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane function. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. Feline epididymal sperm quality can be maintained to the degree necessary for artificial breeding programs following cooling and ACP-117c may be successfully used to recover cat sperm that have been cooled for up to 4h.(AU)

Objetivou-se comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4ºC do epidídimo de gatos domésticos utilizando-se os diluidores ACP-117c e Tris. Sessenta epidídimos foram distribuídos em seis grupos: 10 epidídimos a fresco com o Tris (T0h), 10 a 4°C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Os complexos testículo-epidídimo (CTE) do controle não foram refrigerados. Os outros foram refrigerados a 4°C durante duas e quatro horas. Os epidídimos foram separados das demais estruturas, e os espermatozoides recuperados pela técnica de flutuação modificada. Os parâmetros cinéticos foram avaliados em um sistema computadorizado, e o vigor, a viabilidade, a concentração, a funcionalidade de membrana e a morfologia celular foram avaliados em microscopia de luz. A motilidade progressiva com ACP-117c declinou após duas horas de refrigeração, mas não diferiu entre a recuperação a fresco e após refrigeração por quatro horas. Vigor e integridade funcional da membrana celular foram significativamente superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu significativamente em comparação com T0h. T0h foi significativamente superior ao A0h quanto aos parâmetros de vigor e integridade funcional da membrana espermática, entretanto, após quatro horas de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Os espermatozoides epididimários de felinos domésticos conseguem manter a qualidade necessária para serem utilizados em programas de reprodução artificial após serem refrigerados e recuperados por meio da técnica de flutuação modificada, e o diluidor ACP-117c pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas refrigeradas de gatos por até quatro horas.(AU)

Laparoscopic ovum pick-up in spotted paca (Cuniculus pacas) / Aspiração folicular por laparoscopia em paca (Cuniculus pacas)

The aim of this work is study the laparoscopic ovum pick-up (LapOPU) technique in spotted paca, describing surgery details, complications and oocyte recovery rate. Nine healthy adult non-pregnant captive females were used, in a total of 39 procedures. When the surgical plane of anaesthesia was achieved, the females were positioned at 20º Trendelenburg. Three 6mm trocars were placed on right and left inguinal and hypogastric regions. Abdomen was inflated with CO2 and the intra-abdominal pressure was stablished in 10mmHg. Follicular punctures were performed moving the ovaries with atraumatic forceps. For punctures, an 18-gauge 3.5 inch long needle attached to a vacuum system with pressure not exceeding 65mmHg was used. Oocytes were recovered into 50mL centrifuge tubes with media composed of PBS supplemented with 10 IU/mL of heparin and kept at 36°C. R Software was used for statistical analysis. Data normality distribution (Shapiro test) and variances homoscedasticity (Bartlett test) were tested and descriptive statistics (mean±SD) was used to present the results. It was only possible to perform LapOPU in 30 of 39 laparoscopies (76.92%). The surgical total time was 37.34 ± 18.53 minutes. The total number of visualized follicles, aspirated follicles, and retrieved oocytes were 502, 415, and 155, respectively. And the same parameters per animal were: 14.34 ± 12.23, 11.86 ± 10.03, and 4.43 ± 4.69 respectively. Oocyte recovery rate was 32.56 ± 27.32%. In conclusion, caudal positioning of portals with slight triangulation allows good viewing of the abdominal cavity and eases the manipulation of the ovaries. Thus this described LapOPU technique is feasible in spotted paca and easy to perform.(AU)

Objetiva-se, com este trabalho, estudar a técnica de aspiração folicular por videolaparoscopia (LapOPU) em pacas, descrevendo detalhes do procedimento cirúrgico, complicações e taxa de recuperação oocitária. Para isso, foram utilizadas nove fêmeas, saudáveis, adultas, não gestantes e mantidas em cativeiro, totalizando 39 procedimentos. Quandoo plano anestésico cirúrgico foi alcançado, as fêmeas foram posicionadas em Trendelenburg com 20º de angulação. Três trocáteres foram colocados nas regiões inguinais direita e esquerda e hipogástrica. O Abdômen foi insuflado com CO2, e a pressão intra-abdominal foi mantida em 10mmHg. Punções foliculares foram realizadas manipulando-se os ovários com pinças atraumáticas. Para aspirações foliculares, usou-se agulha de 18G com bisel curto acoplado ao sistema de vácuo com pressão não excedendo 65mmHg. Oócitos foram recuperados em tubos de centrifugação de 50mL contendo meio composto de PBS suplementado com 10UI/mL de heparina e mantidos a 36ºC. Usou-se software R para análise estatística. Testaram-se a distribuição normal dos dados (teste de Shapiro) e a homocedasticidade das variâncias (teste de Barlett) e se usaram estatísticas descritivas (média±DP) para apresentar os resultados. Das 39 videolaparoscopias, só foi possível realizar LapOPUem 30 delas (76,92%). O tempo cirúrgico total das LapOPU foi de 37,34 ± 18,53 minutos. Os números totais de folículos visualizados, folículos aspirados e oócitos recuperados foram: 502, 415 e 155, respectivamente. E os mesmos parâmetros por animal foram: 14,34 ± 12,23, 11,86 ± 10,03 e 4,43 ± 4,69, respectivamente. A taxa de recuperação foi de 32,56 ± 27,32%. Assim, conclui-se que o posicionamento caudal de portais, com ligeira triangulação, permite uma boa visualização da cavidade abdominal e facilita a manipulação dos ovários, sendo essa técnica de LapOPU viável em pacas e de fácil execução.(AU)

Viable offspring after successful non-surgical embryo transfer in goats / Nascimento de fetos viáveis após transferência de embriões não-cirúrgica em caprinos

O objetivo do presente estudo foi avaliar a viabilidade da técnica de transferência não cirúrgica em cabras. Quatro cabras não-lactantes pluríparas da raça Toggenburg foram utilizadas como receptoras de embriões, sendo que duas receberam um embriões e duas receberam dois embriões coletados não cirurgicamente cabras doadoras. Os corpos lúteos das receptoras foram detectados um dia antes da transferência de embriões por ultrassonografia transretal. Uma seringa de 5mL contendo 2mL de meio holding foi acoplada em um cateter tomcat, no qual os embriões foram aspirados em uma coluna central a duas outras colunas. Um espéculo Colin número 2 foi inserido na vulva e na vagina, e com o uso de uma fonte de luz, a cerviz foi localizada e imobilizada com uma pinça de Allis. Um cateter uretral número seis acoplado a um mandril e lubrificado com meio PBS foi inserido na cérvix, e assim os aneis cervicais foram gradualmente transpostos. Após perder a resistência, o cateter uretral foi movido lateralmente para o corno uterino desejado. O mandril e a pinça de Allis foram retirados e o conjunto seringa e tomcat foi acoplado ao cateter uretral e o conteúdo injetado no corno uterino ipsilateral ao corpo lúteo com posterior retirada do cateter. Cabras que ovularam em apenas um ovário foram usadas para testar a eficiência da deposição do embrião. O tempo gasto entre a inserção do espéculo e a sua remoção foi inferior a três minutos. O tempo para transpor a cérvix foi inferior a um minuto. A ultrassonografia revelou a deposição de líquido no corno desejado. Receptoras que receberam dois embriões tornaram-se gestantes e pariram três crias. Estes primeiros resultados encorajam a técnica e demonstram que a transferência de embriões em caprinos pode ser feita totalmente por procedimentos não cirúrgicos...

Genome association analysis for pregnancy status following parturition in crossbred beef cattle / Estudo de associação genômica de prenhez pós-parto em vacas de corte

The aim of this study was to evaluate genetic diversity of nine molecular markers, six short tandem repeats - STRs (BM4325, BMS3004, ILSTS002, IDVGA51, HEL5, AFZ1) and three single nucleotide polymorphisms (SNPs; LepSau3A1 A-B, LepSau3A1 1-2, and FSHRAlu1), linked to genes involved in reproductive function and their possible effect on reproductive performance. For this purpose, 81 crossbred beef cows were used in this study. The animals were classified into two groups (fertile and sub-fertile cows) based on their pregnancy status after two breeding seasons. High genetic diversity level was observed highlighted by the polymorphic content information ranging 0.23 to 0.87 and expected heterozygosity from 27 to 89%, with an average of 62%. Alleles BM4325 103, BMS3004 129, ILSTS002 137, IDVGA51 177, LEPSau3A1 A, LEPSau3A1 1, HEL5 149, AFZ1 119 and FSHRAlu1 G presented high frequencies. Two STRs (IDVGA51 and ILSTS002), linked to Leptin and LH genes, respectively, were associated to reproductive performance. These data support previous findings suggesting the potential use of IDVGA51 and ILSTS002 STRs for reproductive performance selection.

Foi avaliada a diversidade genética de nove marcadores moleculares, dos quais seis do tipo short tandem repeats - STR (BM4325, BMS3004, ILSTS002, IDVGA51, HEL5, AFZ1) e três do tipo single nucleotide polymorphisms - SNPs (LepSau3A1 A-B, LepSau3A1 1-2 e FSHRAlu1), ligados a genes envolvidos na reprodução e seus efeitos na performance reprodutiva. Foram examinadas amostras de sangue de 81 vacas sem raça definida, os animais foram classificados em dois grupos (vacas férteis e subférteis) baseado nas taxas de prenhez de duas estações reprodutivas. Alto nível de diversidade genética foi observado, revelando alto conteúdo de informação polimórfica, variando de 0,23 a 0,87 e heterozigosidade esperada de 27 a 89% com 62% em média. Os alelos mais frequentes foram BM4325 103*, BMS3004 129*, ILSTS002 137*, IDVGA51 177*, LEPSau3A1 A, LEPSau3A1 1, HEL5 149*, AFZ1 119* e FSHRAlu1 G. Os marcadores IDVGA51 e ILSTS002, ligados aos genes da leptina e LH, respectivamente, foram associados a performance reprodutiva. Esses dados suportam achados prévios que sugerem o potencial uso desses marcadores na seleção de animais com maior performance reprodutiva.

Efeito de diferentes formas de cultivo na ação do óxidonítrico na maturação e na integridade da membranaplasmática de complexos cumulus-oócito em bovinos / Influence of different forms of culture on the nitric oxide action on maturation andmembrane integrity on bovine cumulus-oocyte complex

O objetivo do presente estudo foi avaliar se diferentes formas de cultivo interferem no efeito do óxido nítrico (NO)sobre a maturação e a integridade da membrana plasmática do complexo cumulus-oócito de bovinos. Para tanto,realizou-se cultivo em gotas sob óleo mineral ou em placas de quatro poços com a adição de diferentes concentraçõesde nitroprussiato de sódio (SNP, doador de óxido nítrico). Não foi observada diferença (P > 0,05) entre as formas decultivo quando se avaliou a integridade de membrana plasmática e a expansão das células do cumulus (CC). Contudo,os oócitos dos grupos controle e os cultivados na presença de 10-3 M de SNP, ambos cultivados em placa, apresentarammaior porcentagem de membrana íntegra do que os mesmos tratamentos cultivados em óleo mineral (P < 0,05).Observou-se que a adição de 10-3 M de SNP diminuiu o grau de expansão das CC e de integridade da membranaplasmática dos oócitos, tanto no cultivo em gota sob óleo quanto em placa, diferindo dos outros grupos (P < 0,05).Semelhante à expansão, a forma de cultivo não interferiu na extrusão do primeiro corpúsculo polar, sendo que a adiçãode 10-3 M de SNP inibiu a extrusão em ambos os sistemas (P < 0,05). Houve um efeito dose-resposta na concentraçãode NO no meio de maturação em ambos os tipos de cultivo (P < 0,05), sendo que esta foi maior no meio de cultivo sobóleo, exceção feita quando se adicionou 10-3 M de SNP, tratamento no qual não houve diferença nos tipos de cultivoempregados. Estes dados mostram que o sistema de cultivo não interferiu na ação do NO na maturação in vitro de COCbovinos, mas interfere na integridade da membrana plasmática do oócito.

The aim of the present study was to evaluate the influence of different forms of in vitro culture on the nitric oxide actionin maturation and membrane integrity on bovine cumulus-oocyte complex. No significant effect was observed betweendifferent forms of culture (mineral oil vs plate; P > 0.05), as much for membrane integrity as for expansion of the CC.However, it was observed that oocytes of the groups control and 10-3 M of SNP, cultivated in plate, had presented greaterpercentage of cell with maintenance of membrane integrity than same treatments cultivated in drop. The addition of10-3 M of SNP showed an inhibitory effect on the expansion and membrane integrity of CC and oocytes in both, culturein drops under oil and plate (P < 0.05). The culture form did not intervene with the extrusion of the first polar corpuscleand the addition of 10-3 M of SNP inhibited this extrusion in the both systems (P < 0.05). There was a dose-responseeffect on the concentration of NO in the maturation medium in both types of cultivation (P < 0,05), and this was higherin the culture medium under oil, except when added 10-3 M of SNP, treatment in which there was no difference in thetypes of cultivation employed. (P<0.05). These data demonstrate that the culture system did not intervene with theaction of the NO in the maturation in vitro of bovine COC, but intervened with the integrity of the plasmatic membraneof the oocyte.